El desarrollo de la cromatografía líquida y sus técnicas.

Existen dos (2) grupos en los cuales se separan las técnicas de cromatografía líquida de acuerdo a su modo de ejecución: Planas (o De Superficie) y de Columna.

Las técnicas Planas tienen como base el principio de capilaridad. Aquí la muestra se coloca como un punto sobre una placa, que puede ser de vidrio o plástica, inicialmente cubierta sobre la superficie con el material de partículas (fase estacionaria), o también puede ser de papel sin material de partículas. Acto seguido, la muestra es arrastrada por el solvente (fase móvil), el cual se distribuye sobre la placa por medio de capilaridad. Este arrastre puede ser lineal ascendente (Fig. 1) o Radial (Fig. 2), esta última puede realizarse sobre una placa de silica o de papel.

Figura 1. Cromatografía de capa fina. Flujo ascendente.

Figura 2. Cromatografía en papel, Flujo radial.

Las técnicas de Cromatografía de columna son más similares a los experimentos realizados por Tswett; en éste una muestra pasa a través de una columna o cartucho que contiene la fase estacionaria y el solvente fluye a través del dispositivo hasta una abertura al final del tubo, donde se recolecta el solvente, el cual contiene solubilizados algunos componentes de la muestra (Fig. 3). Este método se conoce como SPE, extracción en fase solida (por sus siglas en inglés, Solid – phase extraction).

Figura 3. Cromatografía de columna.

En cromatografía los compuestos se separan debido a la interacción ejercida con la fase estacionaria y la fase móvil; Aquellos compuestos que tienen mayor atracción a la fase móvil fluyen con mayor velocidad en la columna y salen primero; por otro lado, los compuestos que poseen mayor afinidad a la fase estacionaria serán retenidos más fuertemente y tomarán más tiempo en abandonar la columna.

Para mejorar la separación de una muestra puede utilizarse fases móviles con un tamaño de partícula inferior a 10 micrones, pero esto aumenta la resistencia de la muestra a fluir, lo cual implica utilizar presiones moderadas o altas, que permitan tener un flujo de solvente óptimo. A este tipo de cromatografía se le conoce como HPLC.