Características del HPLC.

 Las partes básicas que conforman un equipo de HPLC son: La fuente de solvente o reservorio, la bomba de presión (encargada de manejar el flujo del solvente), el inyector (por donde ingresa la muestra), la columna (llena de material de empaque), el detector (puede ser de varios tipo y es el encargado de “ver” la muestra al salir de la columna); a partir del detector hay dos salidas, una es la del desecho del solvente de paso y la otra es la que lleva la información a la estación de información (computador, Fig. 4).

Figura 4. Procesamiento de datos.

Al pasar a través del detector y enviar la información al computador, el sistema se encarga de ir mostrando la información de una manera interpretable; a esta información se le conoce como Cromatograma. Este expone una relación entre la concentración de la muestra con respecto a la línea base de señal de la fase móvil (la señal emitida por el solvente se asume como cero) y el tiempo transcurrido desde el momento de la inyección de la muestra y la salida de los compuestos de la columna cromatográfica.

A partir de la información proporcionada por el Cromatograma y de las variables usadas en el método (velocidad flujo, tipo de columna, etc) es posible llegar a identificar y cuantificar los componentes de una muestra, siempre y cuando se cuente con valores de referencia bajo las mismas condiciones.

El Cromatograma (Fig. 5) está conformado por una línea base que avanza con respecto al tiempo, y las señales de los compuestos, representadas como picos de intensidad y ancho variable, dependientes de las características del método y del compuesto. Un pico grande (mayor área bajo la curva) implica una mayor concentración; un pico pequeño (menor área bajo la curva) implica menor concentración. De igual forma, un pico ancho, se relaciona a mayor afinidad (atracción) con el material de la columna; un pico delgado y fino, se relaciona con una mayor afinidad con el solvente.

Figura 5. Cromatograma generado durante el procesamiento de información.